熒光染料的優(yōu)點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比，因此，根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段， PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
(-)-丁香樹脂酚-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷（標準品）乙二

柯里拉京（標準品）2-炔-1-

人參皂苷F3（標準品）乙二

槐定（標準品）乙二

去甲澤拉木（標準品）四氫噻喃-酮

鹽酸去氫駱駝蓬（標準品）鄰溴氟

巖大戟內酯B（標準品）2-氨基-5-氯吡啶

路路通內酯（標準品）乙肟

甘油三油酸酯（標準品）氯甲

長春花（標準品）間溴氟

長春花甲酸甲酯

脫水長春（標準品）2-羥基茴香硫

長春新（標準品）對氯肼鹽酸鹽

硫酸金雀花；硫酸司巴丁（標準品）巰基甲酸

高烏甲素（標準品）六甲基二硅氧烷

番茄紅素（標準品）酞酰亞

苔黑酚葡萄糖苷；地衣二葡萄糖苷（標準品）吲哚甲

短葶山麥冬皂苷C（標準品）酸叔丁酯
嗉囊食通蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化鐵蛋白Fe65抗體CT-1/CTF1/FITC  熒光素標記心肌營養(yǎng)素1抗體IgG300 ul

酸化鐵蛋白Fe65抗體CT-R/FITC  熒光素標記降鈣素受體抗體IgG100 ul

酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體CSMD1/FITC  熒光素標記抑癌基因CSMD1抗體IgG100 ul

酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體CTBP1/FITC  熒光素標記C端結合蛋白1抗體IgG100 ul

酸化活化復制因子2抗體CT DNA /FITC  熒光素標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG100 ul

酸化活化復制因子2抗體CT DNA /Gold  膠體金標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG(10nm/15nm)100 ul

酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體CTGF/FITC  熒光素標記結締組織生長因子抗體IgG20 ul

發(fā)育分化增強因子1抗體CTLA-4/CD152 /FITC  熒光素標記淋巴細胞相關抗原4/細胞毒性T細胞抗原-4抗體IgG100 ul

酸化發(fā)育分化增強因子1抗體CTSC/PALS/DPP-I/FITC  熒光素標記組織蛋白酶C抗體IgG100 ul
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環(huán)數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。